Когда ученые-исследователи получают гранты, в частности от федерального правительства, они должны продемонстрировать, что деньги были использованы именно в тех целях, на которые они были выделены. В результате ожидается, что ученые и врачи опубликуют результаты этого исследования. Эти публикации оставляют неуничтожимый след в истории.
Исследовательская карьера строится на доказательстве того, что работа, выполненная ученым, продвинула поиски знаний, и ученые делятся этой информацией с коллегами ; и все это для развития науки.
Отцы-основатели признали важность такой работы и предоставили защищенное конституцией США право людям, которые продвинули науку в достаточной степени, чтобы сделать изобретение, которое будет признано полезным для человечества. Право выдавать патенты изобретателям находится в ведении законодательной ветви власти федерального правительства, также известного как Конгресс. Таким образом, эти патенты обеспечивают неуничтожимый отчет о том, что именно было обнаружено, и кем.
По этим причинам мы теперь рассмотрим лишь некоторые из публикаций и патентных свидетельств того, что SARS-CoV-2, также как и другие вирусы, является результатом исследования усиления функциональности, что записано в опубликованных исследованиях, патентах, и, как мы увидим в этой и следующей главах, в финансировании.
Содействовать прогрессу науки и полезных искусств, обеспечивая на ограниченное время авторам и изобретателям исключительное право на их соответствующие сочинения и открытия.
- Конституция США, статья I, раздел 8, § 8.
1974: Первый известный искусственно измененный вирус
Насколько мне известно, первым [1] генетически измененным (при помощи усиления функциональности) вирусом стал Q;-фаг в 1974 году [2]. Это исследование усиления функциональности, как и многие другие проекты, последовавшие за этими исследователями, было оплачено грантами Федерального исследовательского проекта NIH (ROI).
1985: Ранние работы Барика с рекомбинацией коронавирусов
Насколько мне известно, Ральф Барик начал работать с коронавирусами, обнаруженными у мышей, еще в середине 1980-х годов. В 1985 году, когда он работал в Калифорнийском университете в Лос-Анджелесе (UCLA), он и его коллеги из Центра медицинских наук Техасского университета в Хьюстоне (UTHSCH) провели исследование рекомбинантных вирусов, включая коронавирусы [3]. Это исследование было оплачено несколькими грантами, включая грант Национального научного фонда (PCM-4507) и грант на исследования Службы общественного здравоохранения США (AI 19244). Служба общественного здравоохранения США является подразделением Министерства здравоохранения и социальных служб США (HHS).
1987: Патент предоставлен доктору Кэри Б. Маллису на полимеразную цепную реакцию (ПЦР).
Патент № 4683195 был выдан Маллису и другим на «процесс обнаружения присутствия или отсутствия по крайней мере одной конкретной последовательности нуклеиновых кислот в образце, содержащем нуклеиновую кислоту или смесь нуклеиновых кислот».
Четкий обзор этого патента показывает, что Маллис не превышал пятнадцати-двадцати циклов ПЦР [4] для идентификации генетического материала.
1994: Флеминг представляет теорию воспаления и заболеваний сердца
В 1994 году на собраниях Американской кардиологической ассоциации я впервые представил свою теорию воспаления и заболеваний сердца. Я повторял свое выступление в 1995 году, и к 1999 году моя теория стала частью учебника кардиологии [5]. Схема этой теории показана в приложении. Теория, объясняющая воспаление и тромботические хронические заболевания [6], позже была обсуждена в 20/20 [7] и других программах. Я опубликовал информацию о роли многих факторов, в том числе бактерий и вирусов, участвующих как в воспалении, так и в образовании тромбов ; о процессе, который с тех пор я называю воспалительно-тромбозной реакцией (ITR). Именно эта ITR несет ответственность за COVID-19 и смертельные случаи среди людей, которых не лечат от ITR [8].
2000: Создание ДНК из РНК ; обратная транскрипция: уроки, извлеченные из ВИЧ
В начале 2000 года мы узнали, что исследователи из Испании, о работе которых сообщил Пол Алквист из Университета Висконсина, показали, как сочетание комплементарной кодирующей цепи ДНК (кДНК) с экспрессией РНК в ядре позволило исследователям разработать синтетический вирус [9]. Комплементарная ДНК ; это одноцепочечная молекула ДНК, которая химически состоит из одноцепочечной РНК.
Для этого требуется фермент, называемый обратной транскриптазой (ОТ). ОТ делает возможным создание кДНК из РНК. Во время конструирования этого инфекционного кДНК вируса белок-шип вируса был заменен генами белка-шипа другого вируса. В результате был получен химерный вирус (усиление функциональности), инфицировавший желудочно-кишечный тракт свиней. Исследователи пришли к выводу, что теперь это можно использовать для собак, кошек и людей:
Эта кДНК также может быть основой тканеспецифической системы экспрессии, которая может использоваться у четырех видов ; человека, свиней, собак и кошек ; путем замены гена S, включенного в кДНК, геномом коронавируса, инфицирующего целевые виды. Ожидается, что с помощью этой процедуры будут созданы либо полностью инфекционные вирусы, либо, по крайней мере, частично компетентные изоляты, способные экспрессировать чужеродные гены, ; и те, и другие представляют практический интерес [10].
2000: Создание инфекционного передаваемого вируса
После получения финансирования от NIH (грант AI 239476), Барик и другие «улучшили» вирус трансмиссивного гастроэнтерита (TGEV):
Доступность инфекционных структур TGEV, очевидно, принесет пользу исследованиям всех аспектов биологии и патогенеза TGEV, включая анализ репликазы коронавируса и несколько спорных процессов транскрипции, которые управляют экспрессией мРНК субгеномной длины (17, 40, 42, 43) [11].
Барик отметил, что инфекция, вызванная синтетической (произведенной человеком) кДНК, была неотличима от вызванной природным вирусом:
Эти данные показывают, что вирусы, полученные из инфекционных структур кДНК, имели фенотипы, неотличимые от фенотипов TGEV дикого типа в клетках свиней [выделение добавлено] [12].
Из этого исследования ясно, что Барик и другие предвидели возможность дальнейшего манипулирования / создания ДНК:
Наш подход, однако, может предоставить средства для обращения к функции больших блоков ДНК, таких как островки патогенеза, или для непосредственного конструирования хромосом, которые содержат большие интересующие нас кассеты генов (12).
2001: Другие демонстрируют способность генерировать коронавирусы с помощью рекомбинантной (генетической) инженерии
В 2001 году группа немецких исследователей показала, что они тоже могут продуцировать инфекционный коронавирус, используя вирус коровьей оспы [13]. (Вирус коровьей оспы ; это линейный двухцепочечный ДНК-вирус. Он является источником современной противооспенной вакцины). Эти исследователи не только показали, что они могут создать инфекционный коронавирус, но также что они могут выделять его в клетках MRC-5 [14].
Чтобы создать рекомбинантный организм, интересующий ген необходимо сначала выделить и удалить с помощью рестрикционных ферментов [15]. Эти ферменты работают как «молекулярные ножницы», разрезая ДНК с обеих сторон интересующего нас гена. Затем фрагмент ДНК лигируют (присоединяют) к ДНК вектора.
Исследователи отметили преимущество этого подхода обратной генетики:
Классический подход теперь можно дополнить обратным генетическим подходом. Более того, описываемая нами система в принципе также облегчает анализ репликации коронавируса, независимо от жизненного цикла вируса и без необходимости инфицирования через рецепторы. Таким образом, он может быть очень полезным при анализе взаимодействия вируса с клеткой-хозяином в контексте репликации, транскрипции, сборки и высвобождения вируса.
Во-вторых, описываемая нами система дополнит существующие методы получения рекомбинантных коронавирусов (Masters, 1999; Almaz;n et al., 2000; Yount et al., 2000) и значительно продвинет анализ патогенеза коронавируса. С доступными в настоящее время системами должно быть возможно быстрое создание большой коллекции генетически модифицированных коронавирусов; например, внутри- и межвидовые химерные вирусы, вирусы с инактивацией или удалением генов и вирусы с ослабляющими модификациями или дополнительными функциями. Фенотипы, связанные с этими модификациями, по крайней мере те, которые не являются летальными, затем могут быть протестированы на животных моделях инфекции. В частности, это должно дать важную информацию о взаимосвязи между коронавирусной инфекцией и иммунным ответом.
Наконец, представленные нами результаты также должны способствовать разработке коронавирусных векторов для экспрессии чужеродных белков. В долгосрочной перспективе мы полагаем, что экспрессия нескольких субгеномных мРНК в инфицированных коронавирусом клетках может сформировать основу векторной системы, которая позволяет экспрессировать несколько единиц транскрипции, каждая из которых кодирует чужеродный белок. Эти особенности и автономность репликации РНК коронавируса затем могут быть использованы при разработке нового класса векторов РНК-вакцин. (Bredenbeek & Rice, 1992; Mandl et al., 1998) [16]. [выделение добавлено.]